TGIRT™-III Enzyme

規(guī)格：

 10 Reactions (TGIRT10)

50 Reactions (TGIRT50)

5 x 50 µl (TGIRT5x50)

10 x 50 µl (TGIRT10x50)

單位定義：

TGIRT的一個(gè)單元® -III逆轉(zhuǎn)錄酶（RT）活性是酶的使用聚在60℃下聚合1納摩爾的dNTP的在1分鐘（RA）所需要的量/寡（dT）42作為底物。

酶濃度：

200單位/μl

酶儲(chǔ)存緩沖液：

20mM Tris-HCl（pH 7.5），500mM KCl，1mM EDTA，1mM DTT，50％甘油

酶屬性和新穎活動(dòng)：

比逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶更高的熱穩(wěn)定性，持續(xù)合成能力和保真度，允許從高度結(jié)構(gòu)化或重度修飾的RNA （例如tRNA）和包含富含GC的重復(fù)擴(kuò)增的RNA合成全長(zhǎng)，端對(duì)端cDNA 。1-9,12,15,18

新型端對(duì)端模板轉(zhuǎn)換活動(dòng)，可在反轉(zhuǎn)錄過程中連接RNA-seq或PCR適配器，并且無(wú)需單獨(dú)的RNA 3'-適配器連接步驟。1這種模板轉(zhuǎn)換活性極大地促進(jìn)了鏈特異性RNA-seq文庫(kù)的構(gòu)建，而且比使用隨機(jī)六聚體引物或使用RNA連接酶進(jìn)行銜接子連接的方法具有更小的偏差。1,7,8

從退火引物合成cDNA。將退火的引物應(yīng)具有推測(cè)的T 米 > 60的直徑： C.酶與反應(yīng)底物混合，在室溫下，通過加入dNTP的反應(yīng)開始30分鐘的預(yù)溫育，建議。新應(yīng)用的zui宜條件應(yīng)該通過測(cè)試25-450mM NaCl的一系列鹽濃度來(lái)確定。

建議用于酶的用途：

1.全面的鏈特異性轉(zhuǎn)錄組分析。8

2.全細(xì)胞，外泌體，血漿和其他無(wú)細(xì)胞RNA的RNA-seq。7,8,15

3.分析miRNA，tRNA和其他小的非編碼RNA。1-9,12,15

4. RIP-seq，HITS-CLIP，irCLIP和CRAC用于表征RNA-蛋白質(zhì)相互作用和核糖體分析。1,10,11

5.通過高通量測(cè)序鑒定RNA堿基修飾。4,5,13,??14

6.使用諸如SHAPE和DMS修飾的方法進(jìn)行全基因組或靶向RNA結(jié)構(gòu)作圖。1,16

7.富含GC重復(fù)擴(kuò)增的逆轉(zhuǎn)錄和定量。18

8.長(zhǎng)cDNA的合成。1

9.RT-qPCR。1

10.單鏈DNA-seq。17

11.分析FFPE腫瘤樣本（咨詢InGex）。

酶的優(yōu)點(diǎn)：

1.全面的鏈特異性轉(zhuǎn)錄組分析。

核糖核碎片，通用人類參考RNA樣品的TGIRT®-seq概括了人類轉(zhuǎn)錄物和穗突起的相對(duì)豐度，與非鏈特異性TruSeq v2相比，并且優(yōu)于鏈特異性Tru-Seq v3。TGIRT®-seq比TruSeq v3具有更高的鏈特異性，并消除了TruSeq固有的隨機(jī)六聚體引發(fā)的取樣偏差。TGIRT®-seq顯示出更加統(tǒng)一的5'至3'基因覆蓋范圍，并且比TruSeq識(shí)別更多的剪接點(diǎn)。TGIRT®-seq能夠在與結(jié)構(gòu)化小型ncRNA相同的RNA-seq中同時(shí)分析mRNA和lncRNA，包括tRNA，TruSeq數(shù)據(jù)集基本上不存在tRNA。8

2.全細(xì)胞，外泌體，血漿和其他細(xì)胞外RNA的RNA-seq。

快速的處理時(shí)間（通過PCR步驟對(duì)RNA-seq文庫(kù)構(gòu)建<5小時(shí)）; 需要少量的RNA（低ng范圍）; 包括mRNA和lncRNA以及小ncRNA的全面轉(zhuǎn)錄譜，包括tRNA，pre-miRNA和其他結(jié)構(gòu)化小型ncRNA的全長(zhǎng)讀段; 比常規(guī)方法更少的偏差和更大的鏈特異性。7,8,15

3.通過TGIRT®模板轉(zhuǎn)換的RNA-seq文庫(kù)構(gòu)建，如RIP-seq，HITS-CLIP，irCLIP，CRAC，??核糖體譜分析。

快速的處理時(shí)間（通過PCR步驟對(duì)RNA-seq文庫(kù)構(gòu)建<5小時(shí)）; 需要少量的RNA（低ng范圍）; 不需要RNA連接酶，通過減少步驟中的步驟來(lái)減少偏倚并提率。1,10,11

4.比逆轉(zhuǎn)錄病毒RT更高的熱穩(wěn)定性，持續(xù)合成能力和鏈置換活性。

使用錨定寡核苷酸（dT）引物，可以構(gòu)建RNA聚合腺苷酸化的RNA文庫(kù)，與沒有ribodepletion步驟的逆轉(zhuǎn)錄病毒RT相比，具有更均勻的5'至3'覆蓋范圍。1

通過基于毛細(xì)管電泳的方法（如SHAPE或DMS結(jié)構(gòu)圖）進(jìn)行RNA結(jié)構(gòu)作圖，其顯著的讀數(shù)長(zhǎng)度和更少的提前停止時(shí)間比逆轉(zhuǎn)錄病毒RTs更短。1,16

可以分析含有富含GC的重復(fù)擴(kuò)增的RNA模板。18

能夠合成來(lái)自tRNA和其他小型結(jié)構(gòu)化/修飾的ncRNA的全長(zhǎng)，端對(duì)端cDNA，這些逆轉(zhuǎn)錄病毒RT難以治療。4-9,12-15     

5.人血漿和大腸桿菌  基因組DNA的ssDNA-seq 。

通過直接在DNA鏈的3'末端啟動(dòng)DNA合成，同時(shí)連接DNA-seq接頭而不進(jìn)行末端修復(fù)，拖尾或連接，以更簡(jiǎn)單的工作流程捕獲的DNA末端。能夠分析核小體定位，轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，DNA甲基化位點(diǎn)和起源組織。17

參考文獻(xiàn)：

1. Mohr, S., Ghanem, E., Smith, W., Sheeter, D., Qin, Y., King, O., Polioudakis, D., Iyer, V.R., Hunicke-Smith, S. Swamy, S., Kuersten, S., and Lambowitz, A.M. Thermostable group II intron reverse transcriptase fusion proteins and their use in cDNA synthesis and next-generation RNA sequencing. RNA 19, 958-970, 2013.
2. Collins, K. and Nilsen, T. Enzyme engineering through evolution: thermostable recombinant group II intron reverse transcriptases provide new tools for RNA research and biotechnology. RNA 19, 1017-1018, 2013.
3. Enyeart, P.J., Mohr, G., Ellington, A.D., and Lambowitz A.M. Biotechnological applications of group II introns and their reverse transcriptases: gene targeting, RNA-seq, and non-coding RNA analysis. DNA 5:2, 2014.
4. Katibah, G.E., Qin, Y., Sidote, D.J., Yao, J., Lambowitz, A.M. and Collins, K. Broad and adaptable RNA structure recognition by the human interferon-induced tetratricopeptide repeat protein IFIT5. Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 111, 12025-12030, 2014.  
5. Shen, P.S., Park, J., Qin, Y., Li, X., Parsawar, K., Larson, M.H., Cox, J., Chen, Y., Lambowitz, A.M., Weissman, J.S., Brandman, O., and Frost, A. Rqc2p and 60S ribosomal subunits mediate mRNA-independent elongation of nascent chains. Science 347, 75-78, 2015.
6. Zheng, G., Qin, Y., Clark, W.C., Yi, C., He, C., and Lambowitz, A.M. and Pan, T. Efficient and quantitative high-throughput transfer RNA sequencing. Nat. Methods 12, 835-837, 2015.
7. Qin,Y., Yao,J., Wu,D., Nottingham, R., Mohr, S, Hunicke-Smith, S., Lambowitz, A.M., High-throughput sequencing of human plasma RNA by using thermostable group II intron reverse transcriptases. RNA 22, 111-128, 2016.
8. Nottingham, R.M., Wu, D.C., Qin, Y., Yao, J., Hunicke-Smith, S., and Lambowitz, A.M. RNA-seq of human reference RNA samples using a thermostable group II intron reverse transcriptase. RNA 22, 597-613, 2016.
9. Burke, J.M., Kincaid, R.P., Nottingham, R.M., Lambowitz, A.M., and Sullivan, C.S. DUSP11 activity on tri-phosphorylated transcripts promotes Argonaute association with noncanonical viral microRNAs and regulates steady state levels of cellular non-coding RNAs. Genes & Dev. 30, 2071-2092, 2016.

10. Zarnegar, B.J., Flynn, R.A., Shen, Y., Do, B.T., Chang, H.Y. and Khavari, P.A. irCLIP platform for characterization of protein-RNA interactions. Nat. Methods 13, 489-492, 2016.
11. Haque, N. and Hogg, J.R. Easier, better, faster, stronger: Improved methods for RNA-protein interaction studies, Mol. Cell, 2016 http//dx.doi.org/10.1016/j.molcel.2016.05.019
12. Bazzini, A.A., del Viso, F., Moreno-Mateos, M.A., Johnstone, T.G., Vejnar, C.E., Qin, Y., Yao, J., Khokha, M.K., and Giraldez, A.J. Codon identity regulates mRNA stability and translation efficiency during the maternal-to-zygotic transition. EMBO J. 35, 2087-2103, 2016.
13. Clark, W.C., Evans, M.E., Dominissini, D., Zheng, G., and Pan, T. tRNA base methylation identification and quantification via high-throughput sequencing. RNA 22, 1771-1784, 2016.
14. Liu et al. ALKBH-mediated tRNA demethylation regulates translation. Cell 167, 816-828, 2016,
15. Shurtleff, M.J., Yao, J., Qin, Y., Nottingham, R.M., Temoche-Diaz, M., Schekman, R., and Lambowitz, A.M. A broad role for YBX1 in defining the small non-coding RNA composition of exosomes. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 114, 8987-8995, 2017.

16. Zubradt, M., Gupta, P., Persad, S., Lambowitz, A.M., Weissman, J.S., and Rouskin, S. DMS-MaPseq for genome-wide or targeted RNA structure probing in vivo. Nature Methods 10.1038/nmeth.4057, 2016.
17. Wu, D.C., and Lambowitz, A.M. Facile single-stranded DNA sequencing of human plasma DNA via thermostable group II intron reverse transcriptase template switching. Scientific Reports 7, 8421, 2017.
18. Carrell, S.T., Tang, Z., Mohr, S., Lambowitz, A.M, and Thorton, C.A. Detection of expanded RNA repeats using thermostable group II intron reverse transcriptase. Nucleic Acids Res. 46, e1, 2018.

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