smarttubePROT1解凍樣品的解凍方案

加利福尼亞州Smart Tube

PROT1, 100 Test

一瓶蛋白質(zhì)組穩(wěn)定劑。體積足以穩(wěn)定一百五十五毫升全血樣本。還包括解凍在穩(wěn)定劑中冷凍保存的樣品后使用的緩沖液：THAWLYSE1“Thaw-Lyse，1000X Concentrate”。 

所需緩沖區(qū)：

1倍水樣(用蒸餾水稀釋1000倍濃縮液，使工作濃度達(dá)到1倍)。

緩沖器應(yīng)在室溫下

染色緩沖液磷酸鹽緩沖液0.5%牛血清白蛋白)緩沖液應(yīng)在4℃

可能需要的其他緩沖區(qū)：

1倍緩沖液2(用蒸餾水稀釋5倍濃縮液，使工作濃度達(dá)到1倍)。緩沖器應(yīng)在室溫下。

禮儀:

如果樣品沒有凍結(jié)，因?yàn)榉治鰧⒃谕惶爝M(jìn)行，請(qǐng)繼續(xù)進(jìn)行第二步。在冷水浴(10°C至15°C)中用攪拌水(即.=‘class 1’>)解凍冷凍樣品.旋轉(zhuǎn)磁性 攪拌棒或使用軌道震動(dòng)器)大約20分鐘，直到樣品*解凍。另一種方法是，在4°C冰箱的開式機(jī)架中解凍管子大約30分鐘，直到 樣品是*解凍的，不要使用泡沫塑料機(jī)架來保存樣品，因?yàn)闃悠芬獜?80°C快速過渡到*解凍狀態(tài)是很重要的。一旦樣品迅速解凍，m 敬下一步。

加入1倍的SAW-Lyse緩沖液，比例為4：1的穩(wěn)定樣品(即。如果原始樣本為全血1ml，則加入1.4ml穩(wěn)定劑，總體積為2.4m 在穩(wěn)定后，加入至少9.6ml的1xThaw-Lyse緩沖液。將樣品在室溫下攪拌10分鐘。

600×g離心，室溫下離心5分鐘，取白細(xì)胞。扔掉上清液。

1. 將球團(tuán)置于25 ml的1倍Saw-Lyse緩沖液中，室溫下孵育10分鐘。在室溫下，以600×g離心5分鐘。丟棄上清液。 如果球團(tuán)是相對(duì)白色的，紅細(xì)胞溶解是*的。

紅細(xì)胞溶解完成后，樣品再懸浮在染色介質(zhì)中，轉(zhuǎn)移到FACS管或板上，用染色介質(zhì)沖洗。將樣品按600 x g離心5次 幾分鐘?，F(xiàn)在可以像用多聚甲醛固定的白細(xì)胞一樣對(duì)樣品進(jìn)行染色，使用固定細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)染色規(guī)程。注意進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)染色 細(xì)胞必須用酒精滲透。90%甲醇)或洗滌劑(即。0.2%的皂甙)作為智能管道系統(tǒng)，就像傳統(tǒng)的固定方法一樣，產(chǎn)生細(xì)胞膜為s的細(xì)胞 可滲透于小分子染料，如碘化丙酸丙酯，但在其他方面是完整的，不提供適當(dāng)?shù)目贵w進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，而不經(jīng)alc進(jìn)一步滲透。 酒精或洗滌劑。

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建議在一項(xiàng)研究中對(duì)用于解凍樣品的條件(水浴溫度、攪拌和持續(xù)時(shí)間)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。

完整的紅細(xì)胞溶解通常是在步驟4之后實(shí)現(xiàn)的。室溫下穩(wěn)定時(shí)間較長(zhǎng)或樣品在4°C(或更高溫度)保溫時(shí)間較長(zhǎng) 皺縮可能會(huì)使紅細(xì)胞溶解更加困難。

如果紅細(xì)胞溶解在步驟4后未完成，請(qǐng)執(zhí)行以下步驟：

A1.將球粒置于大于15 ml的1xLyse緩沖液中，在室溫下孵育10分鐘，與原藥丸相同，丟棄上清液。如果球團(tuán)是白色的，表示紅細(xì)胞溶解。 完成后，繼續(xù)上面的步驟5。如果沒有，請(qǐng)繼續(xù)下面的步驟A2。

A2.將球團(tuán)置于大于15 ml的1倍Saw-Lyse緩沖液中，在室溫下孵育10分鐘，與以前相同，丟棄上清液。球團(tuán)應(yīng)該是相對(duì)白色的，表示紅細(xì)胞溶解。 S是完整的。繼續(xù)執(zhí)行上面的第5步。

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