prokazyme dlig120說明書

海藻的Rma DNA連接酶

 € 220,00 – € 320,00

耐高溫NAD +依賴的雙鏈DNA連接酶，溫度范圍在5到65°C之間。 

prokazyme DNA連接酶說明書

SKU：dlig120。
類別：酶

描述

來自海生紅球藻的 DNA連接酶是一種熱穩(wěn)定的NAD +依賴性雙鏈DNA連接酶，溫度范圍介于5至65°C之間。所述enzym DNA的具有高保真Ë催化結(jié)扎并適合于各種應(yīng)用，包括基因合成。

產(chǎn)品Dlig120 Rma DNA連接酶可提供500單位和2000單位，以及10x反應(yīng)緩沖液。

商品名：Dlig120S | DNA連接酶500單位| 價(jià)格：220.00 EUR

商品名：Dlig120L | DNA Ligase 2000單位| 價(jià)格：320.00 EUR

產(chǎn)品描述

介紹：

Rma DNA連接酶催化雙鏈DNA結(jié)構(gòu)中相鄰3′-羥基和5′-磷酸末端的NAD依賴性連接。與T4 DNA連接酶相反，Rma DNA連接酶對(duì)平末端DNA的片段沒有可檢測(cè)的活性。與T4 DNA連接酶不同，Rma DNA連接酶在宜溫度條件下僅顯示4 bp和2 bp的共粘性末端的小連接活性。Rma DNA連接酶對(duì)RNA靶沒有活性。從帶有質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中分離和純化Rma DNA連接酶，該質(zhì)粒帶有克隆的DNA連接酶基因，該基因來自冰島分離的嗜熱細(xì)菌Rhodother-mus marinus（1、2）。Rma連接酶在91°C下的半衰期為7分鐘（2）。該酶具有廣泛的反應(yīng)溫度范圍，宜活性約為55°C。

應(yīng)用范圍：

Tsc DNA連接酶是需要高溫，高嚴(yán)格性的雙鏈DNA連接的理想酶.Tsc DNA連接酶可用于：

• 來自重疊寡核苷酸的基因合成（12）。

儲(chǔ)存：
儲(chǔ)存和稀釋緩沖液：20 mM Tris-HCl，50 mM KCl，0.1 mM EDTA，0.1％Triton X-100（v / v），1 mM二硫蘇糖醇（DTT），50％甘油（v / v），pH 7.6（25℃）。當(dāng)在–15°C至-25°C下儲(chǔ)存時(shí)，Rma DNA連接酶是穩(wěn)定的。

反應(yīng)條件：
1 x反應(yīng)緩沖液（已提供10 x）20 mM Tris-HCl，20 mM KCl，10 mM MgCl2、0.1％Nonidet P40（v / v），0.5 mM NAD，1 mM DTT，pH 7 ，5（25°C）。

濃度和單位定義
濃度10 U /μl。1個(gè)單位的Rma DNA連接酶在45°C下在1分鐘內(nèi)催化1μgBstEII消化的λDNA的cos位點(diǎn)的50％連接。

應(yīng)用方案：活性測(cè)定： 用于單位定義的酶測(cè)定是連接用BstII消化的λDNA的cos位點(diǎn)。

 

在45°C孵育1-15分鐘，在干冰/乙醇浴中停止反應(yīng)。在瓊脂糖凝膠上分析之前，在65°C下孵育10分鐘（融解未連接的cos位點(diǎn)）

通過瓊脂糖凝膠電泳和溴化乙錠染色測(cè)定結(jié)果。

質(zhì)量控制：

質(zhì)量控制：
如下所述測(cè)定每批Tsc DNA連接酶的活性和污染活性。

缺少DNA核酸內(nèi)切酶：

• 將0.25μg超螺旋pBR322 DNA與遞增量的Tsc DNA連接酶在25μl反應(yīng)中于37°C孵育16小時(shí)。大于100 U的Tsc DNA連接酶顯示pBR322 DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)沒有松弛。

• 在37℃和64℃下，在25 µl反應(yīng)中用Tsc DNA連接酶誘導(dǎo)加入0.25 µgλ-DNAEco RI / HindIII片段16 h。100 U的Tsc DNA連接酶顯示未改變條帶模式。

核酸外切酶的缺失：將
越來越多的Tsc DNA連接酶在50μl含有[3H]標(biāo)記的DNA的測(cè)試緩沖液中于37°C和64°C孵育4小時(shí)。顯示無核酸外切酶活性的酶量> 100U。

缺少Rnases：
根據(jù)制造商協(xié)議，使用Ambion的RNaseAlertTM Lab Test Kit（目錄號(hào)1964）檢測(cè)RNase活性。1小時(shí)后，在37°C下孵育XU Tsc DNA連接酶后，未檢測(cè)到RNase活性。

參考文獻(xiàn)：

• Alfredsson GA等。1988.微生物學(xué)雜志。134：299-306
• Torbjarnardottir SH等。1995.基因161：1-6
• Housby JN等。2000。核酸研究。28：e10。
• Housby JN等。2001。肛門。生化。302：88-94
• Sutton JR等。1992.轉(zhuǎn)基因研究1：228