無血清細(xì)胞凍存液說明書

上海起發(fā)生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬于上海起發(fā)實驗試劑有限公司（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌，打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時，把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來讓每一個和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè)，共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國生物制造企業(yè)，圓夢中國。

產(chǎn)品詳情

 產(chǎn)品描述

細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境，減少細(xì)胞代謝，以便長期儲存的一種技術(shù)，是細(xì)胞長期保存的重要手段。細(xì)胞凍存液通過冷凍保護(hù)劑在凍存過程中對細(xì)胞進(jìn)行保護(hù)，以減少或防止冷凍冰晶對細(xì)胞造成的損傷。

BIOHUB 無血清細(xì)胞凍存液（藥用級）是一款采用醫(yī)用原料無血清、無需程序降溫的細(xì)胞凍存液，廣泛適用于多種哺乳動物細(xì)胞（腫瘤細(xì)胞和常規(guī)細(xì)胞）的凍存。該凍存液特別優(yōu)化的配方含有雙重保護(hù)細(xì)胞的成份，從細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外同時保護(hù)細(xì)胞免受凍存時冰晶的損傷，大大提高了細(xì)胞的復(fù)蘇率和活力，可用于細(xì)胞長期保存。該產(chǎn)品配方成分明確，不含動物來源性蛋白，不含血清，可減少各類細(xì)菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細(xì)胞的安全。

與傳統(tǒng)凍存液相比，本產(chǎn)品不僅可以避免使用血清，降低血清中未知成分和病毒等感染物質(zhì)給凍存帶來的影響與風(fēng)險，同時，可省去繁瑣費時的程序降溫過程，細(xì)胞可重懸于本產(chǎn)品后直接置于-80℃冰箱長期保存，或次日轉(zhuǎn)移到液氮完成整個凍存過程。

產(chǎn)品性質(zhì)

該產(chǎn)品已通過嚴(yán)格的內(nèi)毒素、滲透壓、pH 測試和無菌檢測（細(xì)菌、真菌和支原體檢測）。成分明確，極大降低批次間差異

產(chǎn)品特點

1、即用型細(xì)胞凍存液——優(yōu)化的營養(yǎng)成分配方，不需要逐次用多種試劑自行配制凍存液

2、直接凍存于-80℃冰箱，長期保存（>5 年），不需要程序性降溫

3、高安全性，病毒、病菌和支原體等污染可能性低——不含動物來源性蛋白，不含血清，可減少各類細(xì)菌病毒和支原體等污染

使用方法

使用方法

一 凍存細(xì)胞復(fù)蘇步驟

1. 選擇處于指數(shù)生長期的細(xì)胞，按照常規(guī)方法收集貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞于離心管中。

2. 1000 rpm-2000 rpm，離心 5 分鐘，收集培養(yǎng)細(xì)胞沉淀，棄上清液。

3. 加入適量 4℃預(yù)冷的 BIOHUB 無血清細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。 （按照細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計算所需凍存液的量，推薦凍存密度：1x10⁶ 至 5x10⁶cells/mL。） 

4. 將細(xì)胞懸液分裝至已標(biāo)記的凍存管中，建議每管 1mL 或 1.5mL。

直接將細(xì)胞凍存管放入-80℃超低溫冰箱中，可長期冷凍保存。如果想放入液氮中長期保存，需先放入-80℃冰箱至少 12 小時，方可移至液氮罐中長期保存。

二  凍存細(xì)胞復(fù)蘇步驟

1. 在 15 mL 離心管中加入 5-10 mL 平衡至室溫的培養(yǎng)基。

2. 從-80℃冰箱/液氮中取出凍存的細(xì)胞，立即放入 37℃水浴鍋或其他細(xì)胞復(fù)蘇設(shè)備中，迅速解凍。

3. 將凍存管中的細(xì)胞懸液逐滴轉(zhuǎn)移至預(yù)先準(zhǔn)備好的含培養(yǎng)基的離心管中，1000 rpm-1500 rpm，離心 5 分鐘，收集細(xì)胞沉淀，棄上清（操作時小心，切勿將細(xì)胞沉淀移去）。

4. 加入適量平衡至室溫的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種到事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)容器中，輕輕搖晃培養(yǎng)容器，使細(xì)胞分布均勻。

5. 鏡檢細(xì)胞后，可根據(jù)各自研究的需要和方法進(jìn)行細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)。培養(yǎng) 5-24h 后，觀察細(xì)胞狀態(tài)，可視情況更換鮮細(xì)胞培養(yǎng)液。

實驗案例分析

1.選擇處于對數(shù)生長期的四種細(xì)胞，按照常規(guī)方法收集細(xì)胞于離心管中。

2.1000 rpm，離心 5 分鐘，收集培養(yǎng)細(xì)胞沉淀，棄上清液。

3.加入適量 4℃預(yù)冷的 BIOHUB 無血清細(xì)胞凍存液、T 公司凍存液、X 公司凍存液分別重懸細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。凍存密度為 1x106 cells/mL。

4.將細(xì)胞懸液分裝至已標(biāo)記的凍存管中，每管 1mL，放入-80℃冰箱中，冷凍保存。

5.凍存 6 個月后，進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇，對復(fù)蘇后的細(xì)胞進(jìn)行臺盼藍(lán)染色，統(tǒng)計細(xì)胞存活率。

細(xì)胞凍存 6 個月后復(fù)蘇，對復(fù)蘇后的細(xì)胞進(jìn)行臺盼藍(lán)染色，統(tǒng)計細(xì)胞存活率

細(xì)胞凍存流程分解圖：

注意事項

1. 本產(chǎn)品可-30℃至-10℃保存，若長期不用，再次使用時，請在 2-8℃或室溫（22-25℃，不超過 4小時）融化 ；

2. 避免反復(fù)凍融；

3. 使用此無血清細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞后，應(yīng)盡量減少凍存細(xì)胞在外存放時間，盡快移入-80℃超低溫冰箱長期保存；

4. BIOHUB 無血清細(xì)胞凍存液（藥用級）含有 DMSO，部分對 DMSO 敏感的細(xì)胞、淋巴細(xì)胞或干細(xì)胞凍存，建議使用本產(chǎn)品對其進(jìn)行試驗性凍存、復(fù)蘇、培養(yǎng)，確認(rèn)性能后再進(jìn)行正式凍存；

5. 該產(chǎn)品在室溫條件下放置的時間不宜過長，以免影響凍存效率；

     免責(zé)聲明: 本公司將不為任何不正當(dāng)使用此產(chǎn)品所發(fā)生的意外負(fù)責(zé)；為了您的健康安全，請規(guī)范操作，穿戴實驗服與手套開展實驗；

     本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及治療

運輸及保存方法

保存：短期：2-8℃ 6 個月；長期-20℃保存，24 個月。

運輸：冰袋運輸。