【一、品牌與公司定位】

AssayQuant Technologies 是一家聚焦生物醫(yī)藥研發(fā)領(lǐng)域的生物技術(shù)企業(yè)，由來(lái)自麻省理工學(xué)院的科研團(tuán)隊(duì)發(fā)起創(chuàng)立，核心方向集中于蛋白激酶與蛋白磷酸酶的活性檢測(cè)方案開(kāi)發(fā)。公司圍繞自主搭建的 PhosphoSens 技術(shù)平臺(tái)，構(gòu)建了從熒光傳感器肽底物到完整檢測(cè)試劑盒的產(chǎn)品矩陣，服務(wù)于基礎(chǔ)科研、藥物篩選、先導(dǎo)化合物優(yōu)化以及作用機(jī)制研究等多個(gè)環(huán)節(jié)。

與行業(yè)中普遍采用的偶聯(lián)酶法、放射性法或抗體依賴(lài)型檢測(cè)不同，AssayQuant 的技術(shù)路徑選擇在底物層面做文章——通過(guò)在肽段中嵌入專(zhuān)屬設(shè)計(jì)的 Sox 熒光基團(tuán)，讓磷酸化事件本身直接轉(zhuǎn)化為熒光信號(hào)的變化。這一思路讓檢測(cè)流程回歸"催化行為本身"，減少了二次反應(yīng)、抗體結(jié)合或洗滌步驟帶來(lái)的噪聲與偏差。目前，該平臺(tái)已覆蓋超過(guò) 600 個(gè)激酶與磷酸酶靶點(diǎn)，配套熒光肽底物庫(kù)規(guī)模超過(guò) 50,000 條序列，并被多篇同行評(píng)審文獻(xiàn)引用。

【二、核心優(yōu)勢(shì)】

▲ 底物源自天然序列

傳感器肽段基于生理狀態(tài)下的真實(shí)激酶/磷酸酶識(shí)別序列優(yōu)化而來(lái)，而非在人工序列上強(qiáng)加賴(lài)氨酸、精氨酸或大分子報(bào)告基團(tuán)。這樣的設(shè)計(jì)讓酶與底物的相互作用更貼近體內(nèi)情形，生化實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與細(xì)胞水平結(jié)果之間的相關(guān)性更穩(wěn)健。

▲ 信號(hào)機(jī)制直接

采用螯合增強(qiáng)熒光（ChEF）原理，Sox 熒光團(tuán)本身不參與信號(hào)放大，只在磷酸化發(fā)生后因與鎂離子及磷酸根螯合而改變熒光輸出。整個(gè)過(guò)程不需要偶聯(lián)酶、不需要抗體、不需要洗滌，屬于均相"加樣-讀板"流程。

▲ 兩種互補(bǔ)讀取格式

連續(xù)熒光強(qiáng)度（FI）格式適合機(jī)制研究、動(dòng)力學(xué)參數(shù)求解；紅移時(shí)間分辨熒光（TRF）格式以銪離子置換鎂離子，將發(fā)射波長(zhǎng)移至 620 nm 左右，可避開(kāi)化合物自身熒光干擾，更適合高通量篩選。

▲ 兼容常規(guī)設(shè)備與多規(guī)格板型

檢測(cè)可在 96 孔、384 孔、1536 孔板上開(kāi)展，讀取端僅需配備常見(jiàn)熒光通道的酶標(biāo)儀，無(wú)需添置專(zhuān)屬硬件。

▲ 適配多樣品類(lèi)型

無(wú)論純化重組酶、免疫沉淀激酶、還是粗制細(xì)胞/組織裂解物，同一套傳感器均可工作，且對(duì) ATP 濃度沒(méi)有硬性限制，可依據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)自行調(diào)整。

▲ 數(shù)據(jù)維度豐富

連續(xù)讀取模式下可每 30 秒至數(shù)分鐘采集一次信號(hào)，完整呈現(xiàn)反應(yīng)曲線(xiàn)，支持 IC??、K?、k???c?/K?、停留時(shí)間等動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算，也能通過(guò)跳躍稀釋實(shí)驗(yàn)區(qū)分可逆與不可逆抑制模式。

【三、代表性產(chǎn)品介紹】

▌產(chǎn)品一：連續(xù)熒光強(qiáng)度激酶檢測(cè)試劑盒（PhosphoSens-Kinetic 系列）

● 品名：連續(xù)熒光強(qiáng)度激酶檢測(cè)試劑盒

● 產(chǎn)品特點(diǎn)

?? 基于 PhosphoSens 傳感器肽底物，磷酸化后熒光強(qiáng)度隨產(chǎn)物累積線(xiàn)性上升

?? 激發(fā)約 360 nm，發(fā)射約 485 nm，可在常規(guī)熒光酶標(biāo)儀上讀取

?? 支持純化酶與粗裂解物兩類(lèi)樣品

?? 反應(yīng)為均相加樣-讀板模式，無(wú)洗滌、無(wú)偶聯(lián)酶

?? Z' 因子通常優(yōu)于 0.7，批次間一致性穩(wěn)定

?? 同一傳感器可在連續(xù)模式與終點(diǎn)模式間切換（終點(diǎn)模式需補(bǔ)加銪離子）

● 存儲(chǔ)條件

?試劑盒各組份收貨后按標(biāo)簽指示溫度存放，傳感器肽底物與酶組份建議避光、-20℃ 保存，避免反復(fù)凍融；ATP 與鎂離子組分按說(shuō)明書(shū)常溫或 4℃ 存放即可。

● 工作原理

?將 Sox 熒光團(tuán)通過(guò) Fmoc-Cys-Sox（CSx）構(gòu)建塊定點(diǎn)接入肽段磷酸化位點(diǎn)鄰近位置。反應(yīng)體系中加入激酶、ATP 與 Mg2? 后，底物被磷酸化，磷酸根與 Sox 上的螯合位點(diǎn)結(jié)合 Mg2?，觸發(fā)螯合增強(qiáng)熒光效應(yīng)，熒光強(qiáng)度與磷酸化產(chǎn)物量成正比。因信號(hào)來(lái)自底物本身的化學(xué)變化，無(wú)需二級(jí)檢測(cè)試劑。

● 使用方法

?① 按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)在酶標(biāo)板各孔中加入緩沖液、傳感器肽底物、待測(cè)激酶或裂解物；

?② 加入含 Mg2? 的 ATP 溶液?jiǎn)?dòng)反應(yīng)，輕微振蕩混勻；

?③ 將酶標(biāo)板置入讀板機(jī)，設(shè)定激發(fā) 360 nm、發(fā)射 485 nm，按所需時(shí)間間隔連續(xù)采集熒光；

?④ 以時(shí)間-熒光曲線(xiàn)擬合反應(yīng)速率，進(jìn)一步計(jì)算 IC??、K? 等參數(shù)；

?⑤ 若需轉(zhuǎn)為紅移終點(diǎn)讀取，在反應(yīng)結(jié)束時(shí)補(bǔ)加 Eu3? 溶液，靜置數(shù)分鐘后改用 620 nm 通道采集。

▌產(chǎn)品二：紅移時(shí)間分辨熒光激酶檢測(cè)試劑盒（PhosphoSens-Red 系列）

● 品名：紅移時(shí)間分辨熒光激酶檢測(cè)試劑盒

● 產(chǎn)品特點(diǎn)

?? 在同一 Sox 傳感器基礎(chǔ)上，以銪（Eu3?）替代 Mg2? 參與終止與信號(hào)轉(zhuǎn)換

?? 激發(fā)約 360 nm，發(fā)射約 620 nm，屬時(shí)間分辨熒光（TRF）讀取

?? 通過(guò)延遲采集（通常約 100 μs 延遲）避開(kāi)化合物自發(fā)熒光與背景散射

?? 適合化合物文庫(kù)初篩、SAR 循環(huán)中對(duì)背景干擾敏感的項(xiàng)目

?? 可與連續(xù) FI 模式共用同一套傳感器，方法遷移成本低

● 存儲(chǔ)條件

?傳感器肽底物避光、-20℃ 保存；Eu3? 終止液按說(shuō)明書(shū) 4℃ 存放；其余組份參照試劑盒內(nèi)標(biāo)簽溫度指示。

● 工作原理

?前期激酶反應(yīng)階段與連續(xù) FI 試劑盒一致，底物磷酸化后 Sox 產(chǎn)生熒光。反應(yīng)進(jìn)行到預(yù)設(shè)時(shí)間點(diǎn)后，加入含 Eu3? 的終止/轉(zhuǎn)換液，Eu3? 與磷酸化 Sox 形成紅移絡(luò)合物，此時(shí)以時(shí)間分辨模式讀取 620 nm 處發(fā)射信號(hào)。因 TRF 本身通過(guò)延遲門(mén)控剔除短壽命背景熒光，測(cè)試化合物自身的熒光基團(tuán)不再構(gòu)成干擾。

● 使用方法

?① 酶標(biāo)板中各孔加入緩沖液、傳感器肽底物、激酶及樣品；

?② 加入 ATP/Mg2? 啟動(dòng)反應(yīng)，按篩選節(jié)奏設(shè)定孵育時(shí)長(zhǎng)；

?③ 孵育結(jié)束時(shí)每孔加入 Eu3? 轉(zhuǎn)換液，避光靜置使絡(luò)合完成；

?④ 酶標(biāo)儀切換至 TRF 通道，激發(fā) 360 nm、發(fā)射 620 nm、延遲約 100 μs 采集；

?⑤ 以終點(diǎn)熒光值歸一化后計(jì)算抑制率，繪制劑量-響應(yīng)曲線(xiàn)。

▌產(chǎn)品三：連續(xù)熒光強(qiáng)度磷酸酶檢測(cè)試劑盒（PhosphoSens-Phosphatase 系列）

● 品名：連續(xù)熒光強(qiáng)度磷酸酶檢測(cè)試劑盒

● 產(chǎn)品特點(diǎn)

?? 原理與激酶版本對(duì)稱(chēng)——以已磷酸化的 Sox 傳感器肽為底物，磷酸酶去磷酸化后熒光衰減

?? 熒光強(qiáng)度隨時(shí)間下降的速率直接反映磷酸酶催化活性

?? 同樣支持純化磷酸酶與粗裂解物，同樣為均相加樣-讀板

?? 適用于 PTP 家族、SHP 家族、PP 系列等磷酸酶靶點(diǎn)

?? 可配合抑制劑梯度做 IC?? 與選擇性評(píng)價(jià)

● 存儲(chǔ)條件

?預(yù)磷酸化傳感器肽底物避光、-20℃ 保存，避免反復(fù)凍融；磷酸酶反應(yīng)緩沖液與輔因子組份按標(biāo)簽 4℃ 存放。

● 工作原理

?試劑盒提供的傳感器肽段在出廠(chǎng)前已完成 Sox 位點(diǎn)磷酸化。加入磷酸酶后，磷酸根被水解脫落，Sox 螯合結(jié)構(gòu)被破壞，熒光強(qiáng)度隨之下降。熒光衰減的斜率即為磷酸酶催化速率，全程無(wú)需偶聯(lián)酶或顯色/放免檢測(cè)。

● 使用方法

?① 酶標(biāo)板中各孔加入反應(yīng)緩沖液與預(yù)磷酸化傳感器肽底物；

?② 加入待測(cè)磷酸酶樣品（純化酶或裂解物）啟動(dòng)反應(yīng)；

?③ 酶標(biāo)儀設(shè)定激發(fā) 360 nm、發(fā)射 485 nm，連續(xù)采集熒光衰減曲線(xiàn)；

?④ 以初始速率擬合酶活性，或通過(guò)抑制劑梯度得到 IC??；

?⑤ 若樣品背景熒光較高，可參照激酶紅移思路在終點(diǎn)加入 Eu3? 轉(zhuǎn)為 TRF 讀取。

【四、在實(shí)驗(yàn)中能解決哪些問(wèn)題】

傳統(tǒng)激酶/磷酸酶檢測(cè)常讓科研與篩選人員遇到以下幾類(lèi)困擾，而 PhosphoSens 平臺(tái)在設(shè)計(jì)時(shí)正是針對(duì)這些點(diǎn)做了調(diào)整：

▲ 偶聯(lián)酶法帶來(lái)的噪聲與滯后

許多商用試劑盒依賴(lài)偶聯(lián)酶級(jí)聯(lián)（如 pyruvate kinase/lactate dehydrogenase 耦聯(lián) ATP 消耗至 NADH 吸光度），級(jí)聯(lián)每一步都引入變異系數(shù)，且對(duì)樣品中可能存在的代謝物敏感。PhosphoSens 省去偶聯(lián)環(huán)節(jié)，信號(hào)只來(lái)自底物本身。

▲ 抗體依賴(lài)型檢測(cè)的通量與成本壓力

HTRF、AlphaScreen 等需磷酸化特異抗體與供/受體對(duì)，抗體批次差異、樣品中內(nèi)源 IgG 干擾、以及每孔試劑成本，都是長(zhǎng)期篩選中繞不開(kāi)的問(wèn)題。PhosphoSens 以化學(xué)熒光團(tuán)取代抗體，均相讀取也更適配 1536 孔擴(kuò)展。

▲ 放射性法的合規(guī)與操作負(fù)擔(dān)

33P-ATP 類(lèi)方法數(shù)據(jù)質(zhì)量高，但涉及同位素采購(gòu)、廢液處理、人員防護(hù)，對(duì)多數(shù)實(shí)驗(yàn)室并不友好。熒光法在保持連續(xù)動(dòng)力學(xué)能力的同時(shí)避開(kāi)了放射性。

▲ 化合物自身熒光導(dǎo)致假陽(yáng)性

在化合物文庫(kù)篩選中，部分分子自帶熒光或在 485 nm 附近有吸收，會(huì)壓低或抬高讀數(shù)。紅移 TRF 格式將發(fā)射移至 620 nm 并加延遲門(mén)控，可顯著壓低這類(lèi)干擾。

▲ 粗裂解物背景高、讀數(shù)不穩(wěn)

細(xì)胞/組織裂解物中含大量蛋白與代謝物，對(duì)偶聯(lián)酶法與顯色法都不友好。PhosphoSens 傳感器尺寸小、疏水性低，且在序列層面已針對(duì)靶點(diǎn)優(yōu)化，在裂解物體系中仍可得到可擬合的反應(yīng)曲線(xiàn)。

▲ 難以區(qū)分可逆與不可逆抑制

多數(shù)終點(diǎn)法只能給一個(gè) IC??，無(wú)法判斷抑制劑是否共價(jià)結(jié)合。連續(xù)動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)配合跳躍稀釋實(shí)驗(yàn)，可從 kinact/Ki 與停留時(shí)間兩個(gè)維度把可逆、不可逆、與時(shí)間相關(guān)的抑制模式分開(kāi)。

【五、關(guān)于采購(gòu)與本品牌的常見(jiàn)疑問(wèn)】

? Q1：國(guó)內(nèi)通過(guò)什么渠道采購(gòu) AssayQuant 產(chǎn)品？

?A：美國(guó) AssayQuant Technologies 的產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)由上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司作為特約代理經(jīng)銷(xiāo)商提供服務(wù)，包括貨期確認(rèn)、目錄選型、定制底物咨詢(xún)與售后技術(shù)對(duì)接。

? Q2：試劑盒到貨后保質(zhì)期與存儲(chǔ)有什么要注意的？

?A：傳感器肽底物類(lèi)組份對(duì)光與凍融較敏感，建議收貨后立即按標(biāo)簽溫度避光存放，-20℃ 條件下避免多次凍融；ATP、緩沖液等組份按說(shuō)明書(shū)指定溫度即可。具體某款產(chǎn)品的開(kāi)封后穩(wěn)定期以說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。

? Q3：現(xiàn)有酶標(biāo)儀能不能直接用？

?A：只要設(shè)備具備熒光強(qiáng)度通道（360 nm 激發(fā) / 485 nm 發(fā)射），連續(xù) FI 格式即可直接跑；紅移 TRF 格式需要設(shè)備支持時(shí)間分辨熒光讀取（360 nm 激發(fā) / 620 nm 發(fā)射，帶延遲門(mén)控）。目前主流多模式酶標(biāo)儀大多覆蓋這兩組參數(shù)。

? Q4：粗裂解物里內(nèi)源激酶/磷酸酶會(huì)不會(huì)干擾？

?A：PhosphoSens 傳感器本身是按單一靶點(diǎn)序列優(yōu)化的，對(duì)目標(biāo)酶有選擇性，但仍建議先做空白裂解物對(duì)照，確認(rèn)背景斜率在可接受范圍。若背景偏高，可調(diào)整裂解物投入量或縮短孵育窗口。

? Q5：ATP 濃度能不能自己改？

?A：可以。PhosphoSens 不綁定特定 ATP 濃度，K? 與 Km 類(lèi)參數(shù)求解時(shí)反而需要設(shè)多個(gè) ATP 梯度。注意 Mg2? 需與 ATP 等摩爾或略過(guò)量，以保證 Sox 螯合效率。

? Q6：如果想測(cè)的靶點(diǎn)在目錄里沒(méi)有怎么辦？

?A：AssayQuant 提供定制傳感器設(shè)計(jì)服務(wù)，依托超過(guò) 50,000 條 CSx 肽庫(kù)的篩選經(jīng)驗(yàn)，可為冷門(mén)激酶或磷酸酶、或其突變體位點(diǎn)開(kāi)發(fā)對(duì)應(yīng)傳感器。國(guó)內(nèi)需求可通過(guò)上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司對(duì)接技術(shù)團(tuán)隊(duì)評(píng)估周期與報(bào)價(jià)。

? Q7：一套試劑盒大概能做多少孔？

?A：以 384 孔板、每孔 20–30 μL 反應(yīng)體積估算，10 nmol 規(guī)格的傳感器肽通?？芍螖?shù)十板至上百板規(guī)模，具體取決于單孔肽濃度設(shè)定。目錄試劑盒的規(guī)格說(shuō)明中會(huì)給出推薦工作濃度區(qū)間。

【特約經(jīng)銷(xiāo)】

上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司為美國(guó)AssayQuant Technologies特約代理經(jīng)銷(xiāo)商，負(fù)責(zé)其在國(guó)內(nèi)的產(chǎn)品供應(yīng)與技術(shù)對(duì)接。如需索取目錄、詢(xún)價(jià)或咨詢(xún)定制底物開(kāi)發(fā)，可通過(guò)上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司常規(guī)聯(lián)絡(luò)方式接洽。

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（注：本文內(nèi)容基于品牌公開(kāi)資料及行業(yè)常規(guī)信息整理，具體以品牌信息文檔為準(zhǔn)。）

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