prokazyme生產(chǎn)和銷售用于研究，診斷和工業(yè)測試目的的新型酶。該公司成立于2006年，是冰島生物技術公司Prokaria的副產(chǎn)品，該公司后來合并為非營利性國有企業(yè)Matis。Prokazyme基于二十年的地熱生物勘探，微生物基因組學和酶發(fā)現(xiàn)。Prokazyme（作為中小企業(yè)）與馬蒂斯組成了一個研究聯(lián)盟，并共同參與了由歐盟資助的一些研究項目。持續(xù)的研發(fā)和與Matis的戰(zhàn)略聯(lián)盟使Prokazyme有機會開發(fā)大量不斷增長的嗜熱細菌和病毒基因數(shù)據(jù)庫，并繼續(xù)開發(fā)新的*酶產(chǎn)品。

Tsc DNA ligase from Thermus scotoductus

來自Thermus scotoductus的Tsc DNA連接酶

一種熱穩(wěn)定的NAD +依賴性雙鏈DNA連接酶，在15至75℃的溫度下具有活性。

來自Thermus scotoductus的 Tsc DNA連接酶是一種熱穩(wěn)定的NAD +依賴性雙鏈DNA連接酶，其活性溫度在15至75℃之間。該酶對平末端DNA的片段沒有活性。 

與其他DNA連接酶相比，熱穩(wěn)定的Tsc DNA連接酶和Rma DNA連接酶（Dlig120）已顯示出有利的性質(zhì)。供參考，請考慮以下文件：

Housby和Southern 2002：  Thermus scotoductus和Rhodothermus marinus DNA連接酶比Thermus thermophilus DNA連接酶具有更高的連接效率。 肛門。生物化學。302：88-94 -  

Housby JN  等人。 2000.  通過熱連接酶優(yōu)化的寡核苷酸連接：將  Thermus scotoductus  和Rhodothermus marinus  DNA連接酶與其他嗜熱連接酶進行比較。 核酸研究 酸性。 28：e10 - 

Thorbjarnardottir SH et  et al。1995年：  Rhodothermus marinus的DNA連接酶編碼基因的克隆和序列分析，以及兩種嗜熱DNA連接酶的過量產(chǎn)生，純化和表征。 基因 161：1-6 -

Jonsson Zo 等。1994：  所述的序列  的DNA  連接酶 -編碼從棲熱菌屬scotoductus基因和保守基序中  的DNA  連接酶。 

基因 151：177-180 -  

產(chǎn)品Dlig119 Tsc DNA連接酶有500單位和2000單位以及10x反應緩沖液。

產(chǎn)品：Dlig119S | DNA連接酶500單位| 價格：220.00 EUR

產(chǎn)品：Dlig119L | DNA連接酶2000單位| 價格：320.00 EUR

產(chǎn)品描述

介紹：

Tsc DNA連接酶催化雙鏈DNA結(jié)構(gòu)中相鄰3'-羥基和5'-磷酸末端的NAD依賴性連接。與T4 DNA連接酶相反，Tsc DNA連接酶對平末端DNA的片段沒有可檢測的活性。與T4 DNA連接酶不同，Tsc DNA連接酶在宜溫度條件下僅顯示小的連接活性，對于4bp以及2bp的粘性末端。Tsc DNA連接酶對RNA靶標沒有活性。從攜帶質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中分離和純化Tsc DNA連接酶，所述質(zhì)粒具有來自冰島分離的嗜熱細菌Thermus scotoduc-tus的克隆DNA連接酶基因（1,2）。Tsc連接酶的半衰期在91℃下為26分鐘（3）。該酶具有寬范圍的反應溫度，下限約為15℃，上限由DNA底物的解鏈溫度（Tm）決定。該酶在7-9的pH范圍內(nèi)的各種DNA聚合酶緩沖液中也具有活性。在宜條件下，與其他常用的熱穩(wěn)定連接酶相比，Tsc DNA連接酶的寡核苷酸連接的速率和程度要高得多（4,5）。

應用：

Tsc DNA連接酶是一種理想的酶，適用于需要高溫，高嚴格連接雙鏈DNA的應用.Tsc DNA連接酶可用于：

• 用于擴增DNA靶標的連接酶鏈式反應（LCR）（6-8）。
• 用于突變分析的寡核苷酸連接測定（OLA）（9-10）。
• 重復擴增檢測（11）用于確定遺傳異常，例如三核苷酸重復，僅用于研究，不用于診斷目的（例如脆性X，亨廷頓?。?。
• 基因合成（12）來自重疊的寡核苷酸。

儲存：
儲存和稀釋緩沖液：20 mM Tris-HCl，50 mM KCl，0.1 mM EDTA，0.1％Triton X-100（v / v），1 mM二硫蘇糖醇（DTT），50％甘油（v / v），pH 7,6（25℃）。Tsc連接酶在-15°C至-25°C的溫度下保存穩(wěn)定。

反應條件：
1×反應緩沖液（10x供應）20mM Tris-HCl，20mM KCl，10mM MgCl 2,0,1％Nonidet P40（v / v），0.5mM NAD，1mM DTT，pH 7 ，5（25°C）。

濃度和單位定義
濃度10 U /μl。一個單位的Tsc DNA連接酶催化在45℃下1分鐘內(nèi)1μgBstEII消化的λDNA的50％cos位點的連接。

應用方案：寡核苷酸連接的反應方案： 解凍下面列出的組分并將它們置于冰上。在設置反應之前，短暫渦旋并離心所有試劑。在放置在冰上的微量離心管中設置反應組分：

典型的溫度曲線是：94℃2分鐘，94℃30秒，45-65℃3分鐘，并重復后兩個溫度30個循環(huán)。99°C，10分鐘。

活性測定：
單位定義的酶測定法是用BstII消化的λDNA的cos位點的連接。

在45°C孵育1-15分鐘。在干冰/乙醇浴中停止反應。在65℃下孵育10分鐘，然后在瓊脂糖凝膠上進行分析（未連接的cos位點熔化）

通過瓊脂糖凝膠電泳和溴化乙錠染色測定結(jié)果。

質(zhì)量控制：

質(zhì)量控制：
每批ThermoPhageTM ssDNA連接酶測定活性和污染活性，如上所述。

缺乏DNA核酸內(nèi)切酶：

• 將0.25μg超螺旋pBR322 DNA與增加量的Tsc DNA連接酶在25μl反應中于37℃溫育16小時。> 100U的Tsc DNA連接酶顯示pBR322 DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)沒有松弛。

• 在25μl反應中，在37℃和64℃下，用Tsc DNA連接酶加入0.25μgλ-DNA Eco RI / HindIII片段16小時。100U Tsc DNA連接酶未顯示條帶圖案的改變。

不含核酸外切酶：將增加量的Tsc DNA連接酶在含有[3H] - 標記的DNA的50μl測試緩沖液中于37℃和64℃溫育4小時。顯示無外切核酸酶活性的酶量> 100U。

缺乏Rnases：
來自Ambion的RNaseAlertTM實驗室測試試劑盒（目錄號1964）用于根據(jù)制造商的方案檢測RNase活性。在1小時后37℃孵育Tsc DNA連接酶的XU后未檢測到RNase活性。

參考文獻：

• Jonsson ZO，et al。1994.Gene 151：177-80
• Kristjansson JK等。1995.系統(tǒng)。申請 微生物。17：44-50
• Thorbjarnardottir SH等人。1995.基因161：1-6
• Housby JN，et al。2000.核酸研究。28：e10。
• Housby JN，et al。2001.肛門。生物化學。302：88-94
• Landegren U等，1988。Science 241：1077-1080
• Landegren U，等1988. Science 242：229-237
• Barany F，1991。PCR Meth。和Appl .. 1：5-16
• Nickerson DA，et al。1990.Proc。國家科?？茖W院?？茖W。美國87：8923-8927
• Baron H，et al。1996. Nature Biotech 14：1279-1282
• Schalling M，et al。1993. Nature Genetics 4：135
• Sutton JR，et al。1992.轉(zhuǎn)基因研究1：228

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