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當前位置:首頁新聞中心肺組織消化手冊

肺組織消化手冊

更新時間:2016-02-16點擊次數(shù):2217

世界*實驗材料供應商 Worthington Biochemical 正式授權(quán)上海起發(fā)為其中國代理, Worthington Biochemical 在一直是行業(yè)的*,一直為廣大科研客戶提供zui為的產(chǎn)品和服務,上海起發(fā)一直秉承為中國科研客戶帶來的產(chǎn)品,的服務,簽約 Worthington Biochemical 就是為了給廣大科研客戶帶來更加完善的產(chǎn)品和服務,您的滿意將是我們zui大的收獲

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Worthington組織消化指南

引言

組織消化酶主要用于組織培養(yǎng)和細胞生物學研究的原代細胞的分離和收集。盡管這些消化酶已經(jīng)普遍應用多年,但是對其組織消化和細胞收集的作用機制卻沒有全面的理解。  由此導致的結(jié)果便是選擇一種消化方法大多是隨機選擇或基于過去的經(jīng)驗,而不是在*理解消化原理的基礎(chǔ)上選擇的消化方案,以及如何根據(jù)具體實驗目的修正消化方案以獲得更好的實驗結(jié)果。

細胞分離程序的目的是zui大程度的獲得功能活性的單個細胞,而影響結(jié)果的原因有很多,包括(不限于)以下:

1、組織類型

2、物種來源

3、動物年齡

4、遺傳改造情況(如knockouts)

5、所用的消化培養(yǎng)液

6、所用的酶

7、消化酶中的雜質(zhì)

8、所用消化酶的工作濃度

9、溫度

10、孵育時間

通常前四個原因沒辦法選擇,而剩下的原因一般由經(jīng)驗決定以獲取zui適實驗結(jié)果。

通過查閱文獻來選擇*組織消化酶和zui適消化條件的研究人員通常被互相矛盾的實驗數(shù)據(jù)搞得一頭霧水。這些巨大差異來源于組織胞外基質(zhì)的復雜而動態(tài)的特性,以及過去常用的粗制、未提純的組織分離酶。另外,組織胞外基質(zhì)由各種蛋白、糖蛋白、脂類和糖脂組成,這些成分的組成比例在不同物種、不同組織、甚至不同發(fā)育(年齡)之間存在明顯的差異,這些因素都極大的影響了消化方案的制定。目前通常使用的粗制酶,如鏈霉蛋白酶、NF1:250、以及含有幾種其他不同濃度蛋白酶的膠原酶、以及各種多糖酶、核酶和脂酶。

本指南總結(jié)了目前常用組織消化酶的zui適消化和細胞收集知識和方法,描述了標準的實驗步驟, 以便于制定一個*的細胞分離方案,同時列舉了一些相關(guān)的參考文獻。

下表列出多種組織的適宜消化酶(含參考文獻,以組織類型和物種分類,詳見鏈接)

脂肪組織

腎上腺組織

骨組織

腦組織

軟骨組織

結(jié)腸組織

內(nèi)皮組織

上皮組織

眼

心臟

腸

腎

肝

肺

淋巴結(jié)

乳腺

其它組織

其他組織

肌組織

神經(jīng)組織

胰腺

腮腺

垂體

前列腺

生殖

動物鱗片

皮膚

脾臟

干細胞

胸腺

甲狀腺/甲狀旁腺

扁桃體

腫瘤

 

 

 

注:使用Worthington公司消化酶的文獻不限于上表鏈接中所列,一般而言,Worthington公司的組織消化酶可用于大多組織類型的消化。

 

肺組織消化手冊

 

物種詳細來源細胞名稱消化用酶培養(yǎng)基參考文獻
牛牛Pulmonary microvessel endothelialCollagenase Type 2: 1000 u/mlPBSDel Vecchio, P., Siflinger-Birnboim, A., Belloni, P., Holleran, L., Lum, H., and Malik, A.: Culture and Characterization of Pulmonary Microvascular Endothelial Cells, In Vitro Cell Dev Biol 28A, 711, 1992
豚鼠豚鼠, 雄性, 250-300 克Alveolar type IIElastase: 40 u/mlPBSSikpi, M., Nair, C., Johns, A., and Das, S.: Metabolic and Ultrastructural Characterizationof Guinea-Pig Alveolar Type II Cells Isolated by Centrifugal Elutriation, Biochim Biophys Acta 877, 20, 1986
(see reference)
豚鼠豚鼠, 雄性, 100 克Single cellsTrypsin: 0.25%CF salt solutionPhillips, H.: Dissociation of Single Cells from Lung or Kidney Tissue with Elastase,In Vitro 8, 101, 1972
人類人類Lung TumorCollagenase Type 1: 45-60 u/mlDMEM/F12Quatromoni, J., Singhal, S., Bhojnagarwala, P., Hancock, W., Albelda, S. and Eruslanov, E.: An Optimized Dissagregation Method for Human Lung Tumors That Perserves the Phenotype and Function of the Immune Cells, J Leukoc Biol 97, 201, 2015
Collagenase Type 2: 15-20 u/ml
Collagenase Type 4: 45-60 u/ml
Elastase: 0.002%
Deoxyribonuclease I: 0.002%
人類人類Alveolar epithelialNeutral Protease: 2 u/mlBronchial Epithelial Growth MediumBarkauskas, C., Cronce, M., Rackley, C., Bowie, E., Keene, D., Stripp, B., Randell, S., Noble, P. and Hogan, B.: Type 2 Alveolar Cells are Stem Cells in Adult Lung, J Clin Invest 123, 3025, 2013
Trypsin: 0.25%
Elastase: 10 u/ml
人類人類Lung endothelialCollagenase Type 2: 0.2%PBSComhair, S., Xu, W., Mavrakis, L., Aldred, M., Asosingh, K. and Erzurum, S.:Human Primary Lung Endothelial Cells in Culture., Am J Respir Cell Mol Biol 46, 723-30, 2012
人類人類LungNeutral Protease: 2 u/mlDMEMFujino, N., Kubo, H., Suzuki, T., Ota, C., Hegab, A., He, M., Suzuki, S., Suzuki, T., Yamada, M., Kondo, T., Kato, H. and Yamaya, M.: Isolation of Alveolar Epithelial Type II Progenitor Cells from Adult Human Lungs., Lab Invest 91, 363, 2011
Collagenase/Dispase: 0.1%
Deoxyribonuclease I: 0.01%
人類人類LungTrypsin: 0.05%DMEMZhu, Y., Skold, C., Liu, X., Wang, H., Kohyama., T., Wen, F., Ertl, R., and Rennard, S.: Fibroblasts and Monocyte Macrophages Contract and Degrade Three-Dimensional Collagen Gels in Extended Co-Culture, Respir Res 2 (5), 295, 2001
Fibroblasts
人類人類, 16-24 周 治療性流產(chǎn)Alveolar type II Trypsin: 50 ug/mlHam's F-12, Eagle's MEMLiley, H., Ertsey, R., Gonzales, L., Odom, M., Hawgood, S., Dobbs, L., and Ballard, P.: Synthesis of Surfactant Components by Cultured Type II Cells From Human Lung, Biochim Biophys Acta 961, 86, 1988
Fetal
人類人類EpithelialTrypsin: 0.02%Medium 199Lechner, J., Haugen, A., McClendon, I., and Pettis, E.: Clonal Growth of Normal Adult Human Bronchial Epithelial Cells in a Serum-Free Medium, In Vitro 18 (7), 633, 1982
人類人類, 12-16 周大胎兒FibroblastsTrypsin: 0.01%Eagle's MEMKan, M., and Yamane, I.: In Vitro Proliferation and Lifespan of Human Diploid Fibroblasts in Serum-Free BSA-Containing Medium, J Cell Physiol 111, 155, 1982
人類人類胎兒, 80 天LungCollagenase: 0.01%HBSSHinz, R., and Syverton, J.: Mammalian Cell Cultures for Study of Influenza Virus. I. Preparation of Monolayer Cultures with Collagenase, Proc Soc Exp Biol Med 101, 19, 1959
(包括豬胎, 70 天, 成年, 250 天)
小鼠小鼠AlveolarCollagenase Type 1: 300 u/mlHBSSMohapatra, A., Van Dyken, S., Schneider, C., Nussbaum, J., Liang, H. and Locksley, R.: Group 2 Innate Lymphoid Cells Utilize the IRF4-IL-9 Module to Coordinate Epithelial Cell Maintenance of Lung Homeostasis., Mucosal Immunol , , 2015
Elastase: 4 u/ml
Neutral Protease: 5 u/ml
Deoxyribonuclease I: 200 u/ml
小鼠小鼠PulmonaryCollagenase Type 4: 0.16%see referenceKim, H., Lee, H., Chang, Y., Pichavant, M., Shore, S., Fitzgerald, K., Ikawura, Y., Israel, E., Bolger, K., Faul, J., DeKruyff, R. and Umetsu, D.: IL-17 Producing Innate Lymphoid Cells and the NLRP3 Inflammasone Facilitate Obescity-associated Airway Hyperractivity, Nat Med 20, 54, 2014
Deoxyribonuclease I: 0.1%
小鼠小鼠LungCollagenase Type 4: 0.3%PBSGuimond, D., Cam, N., Hirve, N., Duan, W., Lambris, J., Croft, M. and Tsoukas, C.: Regulation of Immune Responsiveness In Vivo by Disrupting an Early T-Cell Signaling Event Using a Cell-Permeable Peptide., PLoS ONE 8, e63645, 2013
小鼠小鼠, 8-12 周Lung progenitorCollagenase/Dispase: 0.2%DMEMDriscoll, B., Kikuchi, A., Lau, A., Lee, J., Reddy, R., Jesudason, E., Kim, C. and Warburton, D.: Isolation and Characterization of Distal Lung Progenitor Cells.,Methods Mol Biol 879, 109, 2012
Neutral Protease: 5 u/ml
Deoxyribonuclease I: 0.0025%
小鼠小鼠Lung tumorNeutral Protease: 50 u/mlDMEMVaughan, A., Halbert, C., Wootton, S. and Miller, A.: Lung Cancer in Mice Induced by the Jaagsiekte Sheep Retrovirus Envelope Protein is not Maintained by Rare Cancer Stem Cells, but Tumorigenicity does Correlate with Wnt Pathway Activation., Mol Cancer Res 10, 86, 2012
Collagenase: 400 u/ml
Deoxyribonuclease I: 50 u/ml
小鼠小鼠LungCollagenase Type 3: 0.1%RPMI 1640Hardy, C., LeMasurier, J., Belz, G., Scalzo-Inguanti, K., Yao, J., Xiang, S., Kanellakis, P., Bobik, A., Strickland, D., Rolland, J., O'Hehir, R. and Plebanski, M.: Inert 50-nm Polystyrene Nanoparticles That Modify Pulmonary Dendritic Cell Function and Inhibit Allergic Airway Inflammation., J Immunol 188, 1431, 2012
Deoxyribonuclease I: 0.0025%
小鼠小鼠Lung drainingCollagenase Type 4: 0.1-0.125%HBSSRayamajhi, M., Redente, E., Condon, T., Gonzalez-Juarrero, M., Riches, D. and Lenz, L.: Non-Surgical Intratracheal Instillation of Mice with Analysis of Lungs and Lung Draining Lymph Nodes by Flow Cytometry., J Vis Exp 51, 2702, 2011
小鼠小鼠, 8-10 周Lung mesenchymal stemCollagenase Type 2: 0.2%HBSSChow, K., Jun, D., Helm, K., Wagner, D. and Majka, S.: Isolation & Characterization of Hoechst(low) CD45(negative) Mouse Lung Mesenchymal Stem Cells., J Vis Exp 56, e3159, 2011
小鼠小鼠DendriticCollagenase Type 1: 0.05%HBSSLancelin, W. and Guerrero-Plata, A.: Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells., J Vis Exp 57, e3563, 2011
Deoxyribonuclease I: 0.002%
小鼠小鼠LungCollagenase Type 1: 450 u/mlDMEM/F12Rock, J, Barkauskas, C, Cronc, M, Xue, Y, Harris, J, Liang, J, Noble, P and Hogan, B.: Multiple Stromal Populations Contribute to Pulmonary Fibrosis Without Evidence for Epithelial to Mesenchymal Transition., Proc Natl Acad Sci U S A 108, E1475, 2011
Elastase: 4 u/ml
Neutral Protease: 5 u/ml
Deoxyribonuclease I: 0.33 u/ml
小鼠小鼠, fe雄性, 6-12 周Lung mononuclearCollagenase Type 4: 500 u/mlHBSSBreslow, R., Rao, J., Xing, W., Hong, D., Barrett, N. and Katz, H.: Inhibition of Th2 Adaptive Immune Responses and Pulmonary Inflammation by Leukocyte Ig-Like Receptor B4 on Dendritic Cells., J Immunol 184, 1003, 2010
Deoxyribonuclease I: 0.002%
小鼠小鼠LungCollagenase Type 2: 300 u/mlRPMI 1640Ferreira, C., Antunes, F., Leonard, V., Welstead, G., Richardson, C. and Cattaneo, R.: Measles Virus Infection of Alveolar Macrophages and Dendritic Cells Precedes Spread to Lymphatic Organs in Transgenic Mice Expressing Human Signaling Lymphocytic Activation Molecule (SLAM, CD150)., J Virol 84, 3033, 2010
Deoxyribonuclease I: 0.015%
小鼠小鼠, 胚胎,  18天Alveolar and fibroblastTrypsin: 2.5%MEMTrotter, A., Kipp, M., Schrader, R. and Beyer, C.: Combined Application of 17Beta-Estradiol and Progesterone Enhance Vascular Endothelial Growth Factor and Surfactant Protein Expression in Cultured Embryonic Lung Cells of Mice., Int J Pediatr 2009, 170491, 2009
Deoxyribonuclease I: 0.2%
Collagenase Type 1: 1250 u/ml
小鼠小鼠LungCollagenase Type 4: 0.1%HBSSZhao, J., Zhao, J., Van Rooijen, N. and Perlman, S.: Evasion by Stealth: Inefficient Immune Activation Underlies Poor T Cell Response and Severe Disease in SARS-CoV-Infected Mice., PLoS Pathog 5, e1000636, 2009
Deoxyribonuclease I: 0.01%
小鼠小鼠DendriticCollagenase Type 1: 0.5%HBSSFlano, E., Jewell, N., Durbin, R. and Durbin, J.: Methods Used to Study Respiratory Virus Infection.,Curr Protoc Cell Biol Vol. Chapter 26,, , Unit 26.3, 2009
小鼠小鼠, 6-7 周Leukocytes and EndothelialCollagenase: 0.2%PBSJungblut, M., Oeltze, K., Zehnter, I., Hasselmann, D. and Bosio, A.:Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue Using the GentleMACS Dissociator., J Vis Exp 29, , 2009
Deoxyribonuclease I: 40-80 u/ml
小鼠小鼠LungCollagenase Type 2: 0.2%PBSJones, R., Capen, D., Cohen, K., Munn, L., Jain, R. and Duda, D.: A Protocol for Phenotypic Detection and Characterization of Vascular Cells of Different Origins in a Lung Neovascularization Model in Rodents., Nat Protoc 3, 388-97, 2008
小鼠小鼠, 18-20 克LungCollagenase Type 3: 0.17%HBSSEbeling, C., Lam, T., Gordon, J., Hollenberg, M. and Vliagoftis, H.: Proteinase-Activated Receptor-2 Promotes Allergic Sensitization to an Inhaled Antigen through a TNF-Mediated Pathway., J Immunol 179, 2910, 2007
小鼠小鼠LungCollagenase Type 2: 300 u/mlDulbecco's PBSFinotto, S., Eigenbrod, T., Karwot, R., Boross, I., Doganci, A., Ito, H., Nishimoto, N., Yoshizaki, K., Kishimoto, T., Rose-John, S., Galle, P. and Neurath, M.: Local Blockade of IL-6R Signaling Induces Lung CD4+ T Cell Apoptosis in a Murine Model of Asthma Via Regulatory T Cells., Int Immunol 19, 685, 2007
Deoxyribonuclease I: 0.001%
小鼠小鼠, 6-16 周Mononuclear CellsCollagenase Type 4: 0.1%RPMI 1640Abonia, J., Hallgren, J., Jones, T., Shi, T., Xu, Y., Koni, P., Flavell, R., Boyce, J., Austen, F. and Gurish, M.: Alpha-4 Integrins and VCAM-1, but not MAdCAM-1, are Essential for Recruitment of Mast Cell Progenitors to the Inflamed Lung., Blood 108, 1588-94, 2006
小鼠小鼠, 8-12 周Mononuclear cellsCollagenase Type 1: 300 u/mlRPMI 1640 mediumWoolard MD, Hodge LM, Jones HP, Schoeb TR, and Simecka JW: The upper and lower respiratory tracts differ in their requirement of IFN-gamma and IL-4 in controlling respiratory mycoplasma infection and disease, J Immunol 172, 6875, 2004
Deoxyribonuclease I: 50 u/ml
小鼠小鼠, 6-10 周Murine pulmonary endothelialCollagenase Type 2: 0.25%HBSSAndonegui G., Bonder C., Green F., Mullaly S., Zbytnuik L., Raharjo E., and Kubes P.: Endothelium-derived Toll-like Receptor-4 is the Key Molecule in LPS-induced Neutrophil Sequestration into Lungs, J Clin Invest 111, 1011, 2003
小鼠小鼠Pulmonary T lymphocytesCollagenase Type 3: 10 mg/lungRPMI mediumHuaux F, Liu T, McGarry B, Ullenbruch M, and Phan SH.: Dual roles of IL-4 in lung injury and fibrosis, J Immunol 170, 2083, 2003
Deoxyribonuclease I: 250 ug/lung
小鼠小鼠Alveolar epithelial cellsNeutral Protease: DMEMPaine R 3rd, Wilcoxen SE, Morris SB, Sartori C, Baleeiro CE, Matthay MA, and Christensen PJ: Transgenic overexpression of granulocyte macrophage-colony stimulating factor in the lung prevents hyperoxic lung injury, Am J Pathol 163, 2397, 2003
Deoxyribonuclease I: 0.01%
小鼠小鼠, 6-8 周Lung and lymph node cellsCollagenase Type 2: 0.1%RPMI 1640Vermaelen KY, Carro-Muino I, Lambrecht BN, and Pauwels RA.: Specific migratory dendritic cells rapidly transport antigen from the airways to the thoracic lymph nodes, J Exp Med 193, 51, 2001
Deoxyribonuclease I: 0.002%
小鼠小鼠LungCollagenase: 100 u/mlKrebs-Henseleit BufferFreedman SD, Katz MH, Parker EM, Laposata M, Urman MY, and Alvarez JG.:A membrane lipid imbalance plays a role in the phenotypic expression of cystic fibrosis in cftr(-/-) mice, Proc Natl Acad Sci U S A 96, 13995, 1999
Deoxyribonuclease I: 200 u/ml
小鼠小鼠, 6-8 周Lung cellsCollagenase Type 3: 150 u/mlHBSSStampfli MR, Wiley RE, Neigh GS, Gajewska BU, Lei XF, Snider DP, Xing Z, Jordana M: GM-CSF transgene expression in the airway allows aerosolized ovalbumin to induce allergic sensitization in mice, J Clin Invest 102, 1704-14, 1998
小鼠小鼠, 雌性, 18-20 克Murine endothelial cellsCollagenase Type 1: 1 mg/mlDMEMDong QG, Bernasconi S, Lostaglio S, De Calmanovici RW, Martin-Padura I, Breviario F, Garlanda C, Ramponi S, Mantovani A,and Vecchi A.: A general strategy for isolation of endothelial cells from murine tissues. Characterization of two endothelial cell lines from the murine lung and subcutaneous sponge implants, Arterioscler Thromb Vasc Biol 17, 1599, 1997
小鼠小鼠, 雌性Antigen presenting cellsCollagenase: 150 u/mlRPMI 1640Hamilton-Easton A, and Eichelberger M: Virus-specific antigen presentation by different subsets of cells from lung and mediastinal lymph node tissues of influenza virus-infected mice, J Virol 69, 6359, 1995
Deoxyribonuclease I: 30 u/ml
豬豬胎(70 天), 成年 250 天LungCollagenase: 0.01%HBSSHinz, R., and Syverton, J.: Mammalian Cell Cultures for Study of Influenza Virus. I. Preparation of Monolayer Cultures with Collagenase, Proc Soc Exp Biol Med 101, 19, 1959
(包括人類胎兒, 80 天)
兔兔, 新西蘭, 白色Alveolar type IITrypsin: 0.05%HBSSScott, J.: The Role of Sera, Growth Factors, and Hormones in the In VitroProduction of Disaturated Phosphatidylcholine and Propagation of Undifferentiated Type II Alveolar Cells from the Fetal Rabbit Lung, Exp Lung Res 12, 181, 1987
兔兔, 新西蘭, 成年的,雄性Alveolar type IITrypsin: 0.0025%Joklik's MEMFinkelstein, J., Maniscalco, W., and Shapiro, D.: Properties of Freshly Isolated Type II Alveolar Epithelial Cells, Biochim Biophys Acta 762, 398, 1983
兔兔,新西蘭, 雄性, 2-3 公斤Clara cellsProtease: 0.1%HEPESDevereux, T., and Fouts, J.: Isolation and Identification of Clara Cells From Rabbit Lung, In Vitro 16 (11), 958, 1980
兔兔, 新西蘭, 白色, 雄性, 1.7 公斤LungPronase: 0.2%Kreb's serum substitute solution, CMFGould, M., Clements, J., Jones, A., and Felts, J.: Dispersal of Rabbit Lung into Individual Viable Cells: A New Model for the Study of Lung Metabolism, Science 178, 1209, 1972
大鼠大鼠LungCollagenase Type 2: 0.2%PBSJones, R., Capen, D., Cohen, K., Munn, L., Jain, R. and Duda, D.: A Protocol for Phenotypic Detection and Characterization of Vascular Cells of Different Origins in a Lung Neovascularization Model in Rodents., Nat Protoc 3, 388-97, 2008
大鼠SD大鼠, 250-300克Alveolar epithelialElastase: 3-4.5 u/mlRPMI 1640Chen J., Chen Z., Narasaraju T., Jin N., and Liu L.: Isolation of Highly Pure Alveolar Epithelial Type I and Type II Cells from Rat Lungs, Lab Invest 84, 727, 2004
大鼠SD大鼠, 300-400 克Pulmonary endothelial cellsCollagenase Type 2: 1000 u/mlDMEM/F-12King J, Hamil T, Creighton J, Wu S, Bhat P, McDonald F, and Stevens T:Structural and functional characteristics of lung macro- and microvascular endothelial cell phenotypes, Microvasc Res 67, 139, 2004
大鼠SD大鼠, 125-150 克Alveolar type I & IIElastase: 2.5-8 u/mlDMEM/F12Liebler, J., Borok, Z., Li, X., Zhou, B., Sandoval, A., Kim, K.and Crandall, E.:Alveolar Epithelial Type I Cells Express Beta 2-Adrenergic Receptors and G-protein Receptor Kinase 2., J Histochem Cytochem 52, 759, 2004
Collagenase Type 1: 1.0%
大鼠SD大鼠, 200-225 克Type II alveolar epithelial cellsElastase: 4.2 u/mlDMEMSunil VR, Connor AJ, Guo Y, Laskin JD, and Laskin DL: Activation of type II alveolar epithelial cells during acute endotoxemia, Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 282, L872, 2002
Deoxyribonuclease I: 0.0001%
大鼠SD大鼠, 雄性, 成年的AlveolarElastase: 2.0 - 2.5 u/mlDMEM/Ham's F-12Kemp, P., Kim, K., Borok., Z., and Crandall, E.: Re-evaluating the Na+Conductance of Adult Rat Alveolar Type II Pneumocytes: Evidence for the Involvement of cGMP-Activated Cation Channels, J Physiol 536 (3), 693, 2001
(see reference)
大鼠 Lewis大鼠, 雄性, 200-250克Interstitial lung macrophagesCollagenase Type 1: 100 u/mlRPMI-1640Steinmuller C, Franke-Ullmann G, Lohmann-Matthes ML, Emmendorffer A:Local activation of nonspecific defense against a respiratory model infection by application of interferon-gamma: comparison between rat alveolar and interstitial lung macrophages, Am J Respir Cell Mol Biol 22, 481-90, 2000
Deoxyribonuclease I: 50 u/ml
大鼠大鼠, 雄性Alveolar epithelialElastase: 40 u/mlDMEMPlanus, E., Galiacy, S., Matthay, M., Laurent, V., Gavrilovic, J., Murphy, G., Clerici, C., Isabey, D., Lafuma, C., and d'Ortho, M.: Role of Collagenase in Mediating in Vitro Alveolar Epithelial Wound Repair, J Cell Sci 112, 243, 1999
大鼠大鼠, 雄性, 200-250克Pulmonary arterial myocytesCollagenase: 0.15%PBSBakhramov, A, Evans, M and Kozlowski, R: Differential effects of hypoxia on the intracellular Ca2+ concentration of myocytes isolated from different regions of the rat pulmonary arterial tree, Exp Physiol 83, 337-47, 1998
Papain: 0.15%
Elastase: 0.05%
大鼠大鼠, 胚胎15天Fetal alveolar epithelial type IITrypsin: 0.1%DMEMFraslon-Vanhulle, C, Bourbon, J and Batenburg, J: Culture of Fetal Alveolar Epithelial Type II Cells,Cell & Tissue Culture: Laboratory Procedures Vol. 2,Doyle, A., Griffiths, J., and Newell, D., John Wiley and Sons, Ltd., 13A:2.1, 1995
大鼠SD大鼠, 雄性, 125-175 克Alveolar epithelialElastase: 2 u/mlEBSSKim, K., Suh, D., Lubman, R., Danto, S., Borok, Z., and Crandall, E.: Studies on the Mechanisms of Active Ion Fluxes Across Alveolar Epithelial Cell Monolayers, J Tiss Cul Meth 14, 187, 1992
大鼠Wistar大鼠EpithelialTrypsin: 0.1%HBSSJassal, D., Han, R., Caniggia, I., Post, M., and Tanswell, A.: Growth of Distal Fetal Rat Lung Epithelial Cells in a Defined Serum-Free Medium, In Vitro Cell Dev Biol 27A, 625, 1991
大鼠SD大鼠, 8 天InterstitialTrypsin: 1.125%HEPES bufferBerk, J., Franzblau, C., and Goldstein, R.: Recombinant Interleukin-1beta Inhibits Elastin Formation by a Neonatal Rat Lung Fibroblast Subtype, J Biol Chem266, 3192, 1991
大鼠Wistar大鼠, 雌性, vir克inAlveolar epithelial type IITrypsin: 1%Eagle's MEMFraslon, C., Rolland, G., Bourbon, J., Rieutort, M., and Valenza, C.: Culture of Fetal Alveolar Epithelial Type II Cells in Serum-Free Medium, In Vitro Cell Dev Biol27A, 843, 1991
大鼠大鼠,食魚動物 344, 雄性Alveolar type II pneumocytesElastase: 40 u/mlHEPES bufferMangum, J., Everitt, J., Bonner, J., Moore, L., and Brody, A.: Co-Culture of Primary Pulmonary Cells to Model Alveolar Injury and Translocation of Proteins, In Vitro Cell Dev Biol 26, 1135, 1990
(see reference)
大鼠SD大鼠,  雄性, 250-400 克Alveolar type IIElastase: 40 u/mlPhosphate-buffered mediumMa, J., LaCagnin, L., Bowman, L., and Miles, P.: Carbon Tetrachloride Inhibits Synthesis of Pulmonary Surfactant Disaturated Phosphatidylcholines and ATP Production in Alveolar Type II Cells, Biochim Biophys Acta 1003, 136, 1989
(see reference)
大鼠Wistar大鼠,  成年的, 雄性 和懷孕母鼠 (已知妊娠)Alveolar type IITrypsin: 0.1%RPMI 1640Batenburg, J., Otto-Verberne, C., Have-Opbroek, A., and Klazinga, W.:Isolation of Alveolar Type II Cells from Fetal Rat Lung by Differential Adherence in Monolayer Culture, Biochim Biophys Acta 960, 441, 1988
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